近日，许昌学院食品安全生物标识快检技术科研团队王德国教授课题组在非洲猪瘟检测研究方面取得重要进展，建立了实时荧光等温扩增技术和可视化等温扩增技术（LAMP）快速检测ASFV的方法。该检测方法特异性强、灵敏度高、简便易行、成本低，既适合实验条件良好的部门使用，又适合实验条件薄弱的基层部门使用，目前已在八家企业示范应用。
检测成本低，给中小企业提供了便利
非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒感染家猪和各种野猪引起一种急性、出血性、烈性传染病。因为目前还没有研制出可靠的疫苗，前期诊断监测成为控制疫情的重要手段。目前猪瘟的防治采用隔离、沼气的诊断办法，检测手段按国家农业部档次认定的产品有三类：“快速检测试纸条”“荧光定量PCR检测”“核酸等温扩增技术”。
王德国教授课题组建立的实时荧光等温扩增技术和可视化荧光等温扩增技术（LAMP）快速检测ASFV方法，相较于其他方法来说，大大降低了技术成本，给中小养殖企业提供了便利。举个例子，用其他方法检测单次市场价在100元左右，ASFV方法成本不到2元。王德国教授团队还设计研发了检测专用设备“水浴锅”，申请了发明专利，购置一台水浴锅只需要几百元。
“对规模较小、条件有限的企业，不具备购买荧光PCR仪的能力，可以使用“水浴锅”设备和相关试剂进行检测，技术要求较低，更加方便可行。前段时间，研发团队对许昌周边部分企业人员进行了专业的培训，反响很不错。”王德国教授解释。
灵敏度高，检测结果更加可靠
近期，王教授团队相关研究成果以“Development of a real-time loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay and visual LAMP assay for detection of African swine fever virus (ASFV) ”为题，发表在国际学术SCI期刊Journal of Virological Methods上。此检测方法灵敏度高，检测限为30拷贝，适合于猪场早期诊断抗发病潜伏期阶段。取样采取血浆化验、唾液检测等方法，样品量几十毫克即可。
据团队介绍，这项方法特异性强、灵敏度高、具有非常强的稳定性，不会在检测中出现假阳性和漏检，且增加了可视化效果，如扩增后试剂颜色保持橘红色则为阴性，橘红色变为浅黄色则为阳性。这种方法适合亚欧地区，比如中国、波兰、乌克兰、俄罗斯、朝鲜、越南、韩国这些地区的病毒监控，该地区出现的25个病毒基因类型都能够被检测到。
致力于食品安全与快速检测
王德国教授课题组所在的河南省食品安全生物标识快检技术重点实验室筹建于2017年，2013年被批准为博士后科研工作站，2016年被河南省发改委批准为河南省工程实验室。
实验室围绕食品安全领域的国际研究前沿，结合河南省食品安全快速检测的实际需求，在核酸等温扩增、分子印迹、小分子生物传感等方向开展关键技术与理论研究。在核酸等温扩增方面，研究引物筛选规律并建立筛选模型，阐释初始模板产生机理，建立相应的DNA模板提取方法和扩增结果判读新方法；在分子印迹检测方面，筛选模板分子，优化合成方法，研究聚合物对模板分子的识别机理；在小分子生物传感方面，合成、表征与优化小分子传感器，研究荧光识别性能及机理。
实验室研发的具有自主知识产权、国际领先的食源性致病菌、生物毒素、转基因成分、掺假食品、农兽药残留等快检产品与配套装备，为食品安全监管与品质控制提供了技术支撑。
“前期我们在基因检测研究方面奠定了很好的基础，这次非洲猪瘟病毒检测研究实际上只花了6个月的时间，选择基因、设计引物、建立试剂的一系列过程都很顺利。希望让更多的养殖企业能够尽快从中受益。”王教授说。
受许昌市市场监督管理局委托，王德国教授课题组已帮助许昌市24家涉及猪肉加工的企业建立起熟肉制品中ASFV核酸的自检方法（可视化LAMP方法）。目前，以该检测方法为基础，许昌学院作为主要单位所起草的河南省地方标准《熟肉与熟肉制品中非洲猪瘟病毒核酸LAMP检测方法》已正式通过立项初审。
（供稿：许昌学院）
